一、設備概述

二、使用前準備

1. 環境檢查
   • 選擇通風良好、干燥陰涼的場地，環境溫度控制在 5-25℃，遠離熱源（如暖氣、烘箱）及易燃物。
   • 罐體需水平放置，底部用防滑墊固定，周圍預留 30cm 操作空間，多罐存放時間距≥50cm。
   • 安裝氧氣濃度報警器（閾值 19.5%），避免氮氣積聚導致窒息。
2. 設備狀態確認
   • 外觀檢查：罐體無凹陷、焊縫無開裂，真空排氣口完好。若罐壁大面積結霜或發燙，提示真空層失效，需立即停用。
   • 閥門測試：緩慢旋轉進 / 排液閥、增壓閥、放空閥，確保無卡滯或泄漏。安全閥需定期校驗，整定壓力 0.09MPa。
   • 配件檢查：提筒、凍存架無變形，液位計（若配備）刻度清晰，耐低溫標簽及防護裝備齊全。
3. 防護裝備穿戴
   • 必須佩戴耐低溫液氮手套（禁用棉質）、全封閉護目鏡及長袖實驗服，防止凍傷和液氮飛濺。

三、核心操作流程

1. 液氮填充
   • 充液：打開放空閥排空內膽空氣，使用金屬漏斗（預冷 1 分鐘）沿罐壁緩慢注入液氮，流速≤3L / 分鐘。建議注入 10L 預冷 30 分鐘，待內膽溫度平衡后補至 80% 容量（約 40L），預留氣相空間防膨脹溢出。
   • 日常補液：通過液位尺或稱重法監測，當液位低于總容量 30% 時需補充液氮。補液前關閉增壓閥，打開放空閥泄壓至壓力表歸零。
2. 自增壓輸液
   • 壓力調節：關閉放空閥，緩慢打開增壓閥，觀察壓力表。當壓力升至 0.05MPa 時，打開排液閥即可連續輸液。輸液過程中若外筒局部結霜屬正常現象，關閉增壓閥后霜層會自然消退。
   • 輸液結束：依次關閉增壓閥、排液閥，打開放空閥泄壓，并用干燥氮氣吹掃管道防冰堵。
3. 樣本存取
   • 快速操作：單次開蓋時間≤1 分鐘，提筒取出后需置于專用支架，避免直接接觸常溫表面導致樣本升溫。
   • 液相存儲：樣本需完全浸沒于液氮中，氣相存儲溫度控制在 - 150~-190℃，防止樣本污染。
   • 凍存管處理：從液氮中取出后立即置入 37℃水浴快速解凍（≤2 分鐘），1 分鐘內轉移至培養基稀釋以降低 DMSO 毒性。

四、維護保養規范

1. 日常巡檢
   • 每日記錄液位高度及環境溫度，若日蒸發量突增 50% 以上，需排查閥門密封性或真空度。
   • 檢查提筒提手、密封圈等易損件，發現老化或變形及時更換。
2. 定期清潔
   • 內膽清洗：每 3 個月排空液氮，待罐體恢復室溫后，用 30-40℃中性洗滌劑擦拭內膽，蒸餾水沖洗后倒置晾干。嚴禁使用硬物刮擦，防止破壞真空層。
   • 閥門維護：每月用無水乙醇清潔閥桿，涂抹少量硅脂保持潤滑，避免冰粒堵塞。
3. 長期停用處理
   • 排空剩余液氮，用干燥氮氣吹掃內膽，關閉所有閥門并擰松密封蓋（保持通風），存放于干燥陰涼處。重新啟用前需檢測真空度，靜置 24 小時無結霜方可使用。

五、安全注意事項

1. 風險防控
   • 禁止在密閉空間操作，避免明火及靜電產生。
   • 液氮泄漏時，立即撤離至通風處，待揮發完畢后用惰性材料吸附殘留液體。
   • 皮膚接觸液氮后，立即用 40℃溫水沖洗 15 分鐘，凍傷起泡需就醫。
2. 生物安全
   • 傳染性樣本需單分區存儲，使用雙人雙鎖管理，存取記錄存檔≥5 年。
   • 凍存管需使用耐 - 196℃的聚丙烯材質，標簽注明樣本名稱、日期及操作人員，防止混淆。
   • 若發現液氮渾濁或樣本管漂浮，需對該批次進行支原體及細菌檢測。

六、應急處理流程

1. 真空層失效
   • 罐體表面結霜面積＞30% 或壓力異常升高，立即轉移樣本至備用罐，聯系廠家檢修。
2. 閥門故障
   • 若排液閥堵塞，可卸下閥體檢修，用 40℃熱風融冰后重新安裝。安全閥結冰時，需送專業機構校驗。
3. 運輸事故
   • 車載運輸時需固定于專用支架，車速≤30km/h。若罐體傾倒，未破損則待液氮揮發后扶正；若破損需疏散人員并聯系專業清理。

七、記錄與追溯

• 建立《液氮罐使用日志》，記錄每次補液時間、液位高度、樣本存取記錄及維護操作。
• 自增壓功能使用時需記錄壓力變化及輸液量，便于能耗分析。